农业生产中除草剂的高频高强度使用，导致其长期残留于土壤中，并且可能会影响农业生态系统功能甚至威胁农业生产。目前，除草剂长期残留量对土壤多功能性和土壤微生物群落的影响尚不清楚。因此本研究选取东北黑土种植区土壤样品，评价了除草剂残留量对土壤多功能性和微生物群落的影响。结果表明除草剂残留量与土壤多功能性呈现二元线性关系。土壤多功能性随着除草剂残留量的增加先升高，当除草剂残留浓度达到约为 310 μg/kg后，土壤多功能性随着除草剂残留量的增加而下降。此外，研究发现微生物群落丰富度在低残留组（LG，小于 310 μg/kg）和高残留组（HG，大于 310 μg/kg）中具有显著差异。其中，特 定 关 键 微 生 菌 属 norank_f__Acetobacteraceae 、 norank_f__Caldilineaceae 、Candidatus_Alysiosphaera 和Gonytrichum 的相对丰度在 LG 和 HG 之间存在显著差异并且与土壤多功能性显著相关。结构方程模型进一步表明除草剂残留也可以通过影响这些特定的关键物种间接影响土壤多功能性。本研究结果强调了长期除草剂残留会显著影响农业土壤多功能性，因此需要合理施用除草剂以维持土壤生态系统的健康。