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不同分化程度PC12细胞中蛋白的定性和定量分析

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；蛋白质组学；定量分析；基质辅助激光解析离子化质谱

PC12细胞来源大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤。在光学显微镜下，PC12细胞单层生长，呈圆形、锥形或者梭形。PC12细胞易于培养、生长迅速、容易贴壁，具有神经细胞的特性，是一个常用的神经细胞株，广泛应用于神经生物、神经化学及神经系统疾病、神经细胞毒性的体外研究。因此，PC12细胞常被用作体外神经细胞模型。
蛋白质组学是一种高通量、高分辨率的蛋白质研究方法。相比于传统的生物化学法，蛋白质组学不再是对单一或极少数蛋白质分割式的研究模式，而是在整体水平上研究细胞内蛋白质组成，因此获得有关蛋白质性质、表达变化及翻译后修饰等方面的信息。随着这种研究方法的不断发展，蛋白质组学在细胞生长、代谢、凋亡等生命活动规律上有所用，也将为探讨相关疾病的发病机制、诊断、预防和新药的开发奠定基础。在以上理论基上，本研究以低分化PC12细胞和高分化PC12细胞为研究对象，在同一条件下分别培养这两种细胞。当细胞的密度到达1×105个/mL时，提取细胞，然后加入裂解液裂解细胞，得到细胞蛋白；用Bradford法测定细胞蛋白浓度后，SDS-PAGE凝胶电泳分离和富集细胞蛋白，对每一个胶条进行胶内酶解，然后用质谱对两种细胞蛋白分别进行定性分析，获取相关蛋白质的全部信息，本实验结果显示：低分化PC12细胞和高分化PC12细胞中表达的蛋白质种类并不完全相同；最后，用乙酰化稳定同位素标记质谱定量方法用于不同分化程度PC12细胞的定量分析中，探究蛋白含量的变化，本实验结果表明：相同种类的蛋白在低分化PC12细胞和高分化PC12细胞中表达量是不一样的。
本研究应用蛋白质组学技术探究PC12细胞分化过程的相关蛋白的变化，旨在探索细胞形态和细胞特性变化的机制，也为深入进行神经保护药物的研发提供了新的线索。